Menetelmä korkean{0}}puhtauden oksitosiinin tuotantoon

Mar 08, 2026 Jätä viesti

Menetelmä 1: Uuttomenetelmä (Maassani tällä hetkellä käytössä oleva menetelmä; se tuottaa alhaisemman puhtauden, mutta tarjoaa alhaisemmat tuotantokustannukset.)
Oksitosiiniliuoksen uuttaminen: Ota 100 g kuivattua aivolisäkkeen takaosan jauhetta ja 30 g kvartsijauhetta, aseta ne kuulamyllyyn ja lisää tislattua vettä. Suorita uutto neljä kertaa samalla menettelyllä. Kussakin vaiheessa lisätyt tislatun veden määrät ovat seuraavat: 1,4 l kahdelle ensimmäiselle uutolle ja 1,3 l seuraaville kahdelle uutolle. Kukin uutto suoritetaan 45 minuutin ajan, minkä jälkeen sentrifugoidaan nesteen keräämiseksi; jäljelle jäävä jäännös alistetaan sitten lisäuutolle. Neljä saatua uutetta yhdistetään, jolloin saadaan oksitosiiniliuos. Yhteenvetona: kuivattu aivolisäkkeen takaosan jauhe [vesi, kuulamylly] → oksitosiiniuute → kromatografinen erotus.

Ota 1 500 g esikäsiteltyä synteettistä zeoliittia, lisää 20 l 0,25-prosenttista etikkahappoliuosta ja kaada sekoituksen jälkeen-seos ionin-vaihtokolonniin. Kun etikkahappoliuoksen taso on laskenut 2–3 cm zeoliittikerroksen pinnan yläpuolelle, lisää oksitosiiniuute välittömästi. Säilytä sopiva virtausnopeus ja kerää tuloksena saatu valkoinen samea eluaatti (tämä fraktio sisältää pääasiassa oksitosiinia; koska oksitosiinin isoelektrinen piste [pI] on 7,7-, kun taas vasopressiinin pI on 10,9 - vasopressiini muodostaa helposti positiivisia ioneja ja adsorboituu siten kolonniin). Heti kun uutteen nestetaso laskee zeoliittikerroksen pinnalle, lisää välittömästi tislattua vettä ja jatka samean eluaatin keräämistä, kunnes virtaus lakkaa. Säädä kerätyn samean eluaatin pH arvoon 3,5 käyttämällä jääetikkaa. Kuumenna liuos nopeasti vesihauteessa 95 asteeseen, pidä tämä lämpötila 3 minuuttia, jäähdytä sitten liuos nopeasti ja jäähdytä yön yli. Yhteenvetona: Oksitosiiniuute [HAc, synteettinen zeoliittikolonni] → samea eluaatti [HAc, kuumennus] → erotettu liuos → adsorptio ja eluointi. Suodata jäähdytetty liuos seuraavana päivänä. Lisää suodokseen 10-prosenttista bentoniittilietettä samalla sekoittaen (lisäämällä 3 ml lietettä 100 ml:aan suodosta). Jatka sekoittamista 1 tunnin ajan adsorption helpottamiseksi, minkä jälkeen seos sentrifugoi. Testaa supernatantti neste käyttämällä sulfosalisyylihapporeagenssiliuosta; saostuman puuttuminen osoittaa, että adsorptioprosessi on valmis. Jos adsorptio on epätäydellinen, toista bentoniitin käsittelyprosessi; yhdistä sen jälkeen molemmista adsorptiovaiheista saadut bentoniittisaostumat. Bentoniitti eluoidaan neljä kertaa käyttäen 1-prosenttista etikkahappoa (tilavuuksilla 1,6 1, 1,4 1, 1,2 1 ja 0,8 1, vastaavasti). Jokaiselle eluaatille lisätään *tert*-butyylitrikloridia, kun liuos on kuumennettu 80 asteeseen; lämpötila nostetaan sitten 95 asteeseen, jäähdytetään nopeasti 25 asteeseen ja joko suodatetaan tai sentrifugoidaan. Neljä tuloksena olevaa suodosta yhdistetään tehon ja vasopressiinirajan määrittämiseksi. Prosessikulku on seuraava: Jäähdytetty liuos [Suodatus] → Suodata [Bentoniittiliete] → Adsorbaatti [1 % HAc] → Eluaatti. Oksitosiini-injektion valmistus:

Määritetty oksitosiiniliuos, joka täyttää laatustandardit, laimennetaan pitoisuuteen 5 U/ml tai 10 U/ml. Sitten se suodatetaan No. 4- tai No. 5-sintratun lasisuppilon läpi, täytetään ampulleihin ja steriloidaan virtaavalla höyryllä 100 asteessa 30 minuutin ajan lopullisen tuotteen saamiseksi. Prosessikulku on seuraava: Oksitosiiniliuos (määritys hyväksytty) [Suodatus, täyttö, sterilointi] → Oksitosiini-injektio.

 

Synteettisen zeoliitin regenerointi: Synteettinen zeoliitti pestään kahdesti tislatulla vedellä. Sitten lisätään 1,5 1 vettä (laskettuna 500 g:aan zeoliittia) ja 150 g natriumkloridia, ja seosta sekoitetaan 2 tuntia, jotta se huuhtoutuu pois ja poistaa vasopressiinin. Zeoliitti pestään sitten tislatulla vedellä, kunnes kloridi-ioneja ei enää ole jäljellä. Lisätään sopiva määrä vettä ja pH säädetään arvoon 9 käyttämällä natriumhydroksidia; seosta sekoitetaan 30 minuuttia, minkä jälkeen supernatantti dekantoidaan. Zeoliitti pestään tislatulla vedellä, pH säädetään rikkihapolla 5,5-6:een ja pestään uudelleen vedellä lähes neutraaliksi. Sitten se suodatetaan ylimääräisen veden poistamiseksi ja kuivataan 105 asteessa tulevaa käyttöä varten. Ennen käyttöä lisätään sopiva määrä vettä ja pH säädetään jääetikkaalla samalla sekoittaen liotuksen mahdollistamiseksi. 10-prosenttisen bentoniittilietteen valmistus: Bentoniittia ja vettä sekoitetaan massa-{17}}tilavuussuhteessa 1:10. Seosta jauhetaan noin 1 tunnin ajan, jonka aikana etikkahappoa lisätään ylläpitämään stabiili pH 3,5. Saatu liete säilytetään sitten jääkaapissa tulevaa käyttöä varten. Menetelmä 2: Kemiallinen synteesi. Ensin syntetisoidaan heptapeptidamidi (segmentit 3–9) alkaen bentsyylioksikarbonyyli-leusiini *p*-nitrofenyyliesteristä; seuraavaksi syntetisoidaan bentsyylioksikarbonyyli-S-bentsyylikysteiini-tyrosiiniatsidi (segmentit 1–2); ja kolmannessa vaiheessa oksitosiini syntetisoidaan.

Lähetä kysely

whatsapp

Puhelin

Sähköposti

Tutkimus